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4、常用的消毒灭菌法有哪些?（1）加热灭菌法
利用高温来杀死微生物（超过最高生长温度）的方法 。加热灭菌的原理：当高温作用于微生物时，首先引起细胞内生理生化反应速率加快，机体内对温度敏感的物质如蛋白质、核酸等，随着温度的增高而遭受不可逆的破坏，尽而导致细胞内原生质体的变化、酶结构的破坏，从而使细胞失去了生活机能上的协调，停止了生长发育 。随着高温的继续作用，细胞内原生质便发生凝固 ， 酶结构完全破坏 ， 活动消失 ， 生化反应停止 ， 渗透交换等新陈代谢活动消失，细胞死亡 。加热灭菌可分干热灭菌和湿热灭菌两大类 。
1）干热灭菌 利用灼烧或干热空气灭菌而没有饱和水蒸气参加的灭菌法称为干热灭菌法 。由于干热灭菌使用方便，方法简单，故在生产上广泛应用 。如火焰灭菌法：直接利用火焰把微生物烧死，故又称焚烧灭菌法 。采用此法灭菌既彻底又迅速，但只适用于金属制的接种工具、试管口及污染物品等的处理 。热空气灭菌法：即在电热恒温干燥箱中利用干热空气来灭菌 。
2）湿热灭菌 即利用蒸汽进行灭菌的方法 。湿热灭菌又分为高压、常压、间歇灭菌和巴氏灭菌4种 。
①高压蒸汽灭菌 由于高压蒸汽具有较强的穿透力和较常压高的温度，能大大缩短灭菌时间，提高工作效率，加之蛋白质在湿热条件下容易变性 ， 在热蒸汽条件下，细菌的芽孢在120℃，经20～30分钟可全部被杀死 。如灭菌材料体积较大，不易被穿透时，可将压力增加到0.152兆帕，延长至1～2小时 。在高压蒸汽灭菌中，灭菌温度随蒸汽压力的增加而升高（图2-6） 。
图2-6 高压蒸汽灭菌锅
在使用高压灭菌锅时，要完全排出锅内的空气而以饱和蒸汽代之 。如果空气不排除干净 ， 则锅内温度将低于同样压力下由纯饱和蒸汽产生的温度，影响灭菌效果 。
此法适用于各种耐热物品的灭菌，如一般培养基、生理盐水等各种溶液、玻璃器皿、工作服等 。所采用的蒸汽压力与时间，应根据待灭菌物品的性质、体积与容器类型等决定 。
②常压蒸汽灭菌 这是采用自然压力、100℃蒸汽进行灭菌的方法 。它设备简单、成本低，当前使用最广泛 。只要砌一个炉灶 ， 买1～2只大锅，上面用砖和水泥砌成，也可用大铁桶、木桶等，体积大小可自行决定，但不宜过大，以装800～1500瓶为好 。设计常压灶时应注意的问题：大小根据生产规模来定，灶顶部最好制成拱圆形，这样冷凝水可沿灶的内壁下流而不会打湿棉塞；灶仓内要有层架结构，以便分层装入灭菌物；灶上应安装温度计 ， 可随时观察灶内温度的变化；因灭菌时间长，锅内水不够蒸发，故容量大的灶要安装加水装置；灶仓的密闭程度要尽可能高 ， 这样既提高灭菌效果，又节省燃料 。菇农在生产中还常用一种小型蒸汽发生装置，引出蒸汽后直接通到下边用木条堑起、四周用多层塑料布密封的菌袋堆中进行常压灭菌 。这种方法不用建灶，简便省工（图2-7） 。常压灭菌一般水烧开后保持8～10小时，闷一夜即可 。
图2-7 简易常压灭菌法
③常压间歇蒸汽灭菌法 这是利用常压蒸汽反复几次灭菌的方法 。具体做法是将待灭菌物品放在锅内 ， 100℃处理1小时左右，杀死微生物的营养细胞，让其冷却至30℃左右 ， 此时芽胞会萌发，再以同样方法加热处理，反复3次 ， 可达到灭菌目的 。该方法可用于不耐高温的药品、营养物、特殊培养基的灭菌 。
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