核酸检测试剂盒是怎么检测,pcr核酸检测是什么意思方法及步骤

1、pcr核酸检测是什么意思方法及步骤核酸检测是目前全球用来对是否携带新冠病毒进行确定的一种有效方式 。目前大家主要使用的是鼻拭子、咽拭子以及抗体血清lgm进行参考 。但是根据最新的新加坡入境要求是进行pcr核酸检测,那么pcr核酸检测是什么意思呢?
pcr核酸检测是什么意思PCR的意思是聚合酶链式反应,能够用来扩增DNA,从而将微量的DNA扩增到能够检测的程度 。有些病毒的核酸是DNA,需要采用这个方法进行检测 。所以PCR并不是进行的检查 , 而是检测DNA的一种方法 。比如乙肝病毒DNA定量 , 用的就是这一种方法 。检查DNA的目的,一方面是可以诊断疾病 , 如果连病原体的DNA都能检测到,就说明感染了这种病原体;另一方面是判断病毒复制的多少,从而判断病情严重程度或者治疗效果 。
pcr核酸检测方法与步骤进行核酸检验 , 需要经过取样、留样、留存、核酸提取、上机检测五个步骤 。
核酸检测的第一步就是采集人体分泌物,用鼻试子或咽试子擦拭鼻腔或咽后壁及双侧咽扁桃体处 。
第二步医务人员进行留样 , 将试子头浸入细胞保存液中,折断尾部后立即旋紧管盖 。
第三部要将样本放入密闭袋中,保存好并及时送检 。
第四步将样本送进实验室,提取核酸 。
第五步 , 将提取物进行荧光PCR扩增反应 。
核酸是什么核酸(nucleicacid) , 是一类由核苷酸(nucleotide)构成的生物大分子,分为核糖核酸(ribonucleic
acid,RNA)和脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic
acid,DNA)两类,其中RNA多为单链结构,DNA多为双链结构 。除朊病毒(prion)外,核酸是构成生命所必需的生物大分子,其主要作用是构成生命体的遗传信息载体,除此之外 , 还有部分核酸可作为及参与构成具有生物活性的酶分子或其他分子机器
核酸检测是什么核酸检测顾名思义就是针对核酸开展检测 。
核酸检测有何独特的优势呢?为何能作为新冠病毒确诊的“金标准”呢?
其实每一种检测方法都有其擅长的应用场景 。以病毒检测为例,通常的免疫学检测方法(胶体金、ELISA、化学发光等)的检测对象是病毒的抗原或抗体,相当于“侧面描绘” 。由于从感染到可检测存在一个时间窗口期,因此免疫学检测方法一般不合适作为早期诊断 。
假阳性与假阴性1、假阳性
假阳性通常比较少 。一般实验室人员操作不当会导致样本间交叉污染或扩增产物的遗留污染,该种情况下可能会导致假阳性 。
不过假阳性可以通过严格控制检测流程、以及执行若干个阴性样本随机参与检测的策略而有效规避 。
在这里需要说明的是 , PCR检测的假阴性与临床的假阴性实际上不是一个概念 。
以网络上激烈讨论的新冠病毒的诊断为例,临床假阴性是指临床症状和影像学高度疑似被感染、但PCR检测却多次或始终为阴性的情况;而PCR检测假阴性是指所采集样本中存在足够量的新型冠状病毒但却没有检出的情况 。
避免核酸检测的假阴性,主要需要解决:(1)被感染者的细胞中有足量的病毒、(2)采集样本中可以采集到含有病毒的细胞、以及(3)检测出样本中的病毒这三个环节 。
其中PCR试剂盒的技术参数优劣主要影响第三个检测环节 。
仅针对第三个检测环节,若样本中病毒数量低于一个程度(低于最低检测限) , PCR试剂盒就无法检出 。从这个角度看,PCR检测的假阴性是无法完全避免的 。这也是为何需要补充开发病毒的特异抗体检测的原因所在 。
沈阳PCR核酸检测实验室实验室建设坚持高标准、严要求,严格按照国家《医学生物安全二级实验室建筑技术标准》进行建设 , 建设面积100余平方米 , 分为试剂贮存和准备区、标本制备与提取区、扩增和产物分析区三个区域 。实验室内配置全自动核酸提取仪、实时荧光定量PCR仪、扩增仪、高压灭菌器、B2型生物安全柜、超净工作台、超低温冰箱等仪器,消毒和防护设施齐全,符合相关生物实验室安全标准 。为防止实验室外的区域被污染,实验室的气压均为负压,有效降低感染风险 。此外,实验室配备了污水处理系统,达到了废液的合理排放和处理 。
*目前我国多地区建设了PCR核酸检测实验室用以进行新冠病毒核酸检测

核酸检测试剂盒是怎么检测,pcr核酸检测是什么意思方法及步骤

文章插图
文章插图
2、核酸检测试剂盒的测试方法根据锐科技发布的文章《如何进行新冠病毒核酸检测?带你揭秘全过程》,目前的病毒核酸检测试剂盒,多数采用荧光定量PCR方法 。检测原理是以病毒独特的基因序列为检测靶标,通过PCR扩增 , 使我们的选择这段靶标DNA序列指数级增加,每一个扩增出来的DNA序列,都可与我们预先加入的一段荧光标记探针结合,产生荧光信号,扩增出来的靶基因越多 , 累计的荧光信号就越强 。所以,核酸检测,其实就是通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否有病毒核酸 。
核酸检测试剂盒是怎么检测,pcr核酸检测是什么意思方法及步骤

文章插图
文章插图
3、核酸检测是什么流程核酸检测流程是什么检测人员让被检测人员张开嘴巴 , 然后用咽拭纸擦拭口腔后壁和双侧扁桃体的分泌物,然后将咽拭纸放入试管中,并旋紧试管盖,最后将试管密封,并在低温保存下尽快的进行送检 。如果测试结果为阴性,患者相对安全,如果测试结果为阳性,该患者就有危险性 。
核酸检测是什么流程
核酸检测是在实验室的条件下,通过分析致病微生物DNA或者RNA基因学的序列,进行临床病因学的确诊 。此种核酸检测的方法是利用PCR扩增的方法进行检测 , 需要很多的步骤,最快也要6个小时才能出结果 。
新型冠状病毒的核酸检测的取样方法既不需要开刀,也不需要打针,只要“轻轻一抹” 。到了发热门诊或者是相应的检查室,医生会让病人张开嘴 。检测人员会先用核酸提取试剂盒去擦拭扁桃体和咽隐窝附近的分泌物,或者通过鼻腔取鼻咽后部的分泌物,放到试管里,再交给检验科去做相应的病毒核酸的检查 。一般做完核酸检测第二天就会出结果 。一般确诊的话,是需要连续做两次核酸检测,有一次阳性的话就可以确诊为新型冠状病毒肺炎患者 。
核酸检测试剂盒是怎么检测,pcr核酸检测是什么意思方法及步骤

文章插图
文章插图
4、新型冠状病毒核酸检测多久出结果 是怎么检测的1、新型冠状病毒的核酸检测一般是使用试剂盒进行,结果一般需要6个小时左右 , 因此在采集的当天往往就能够得到结果 。如果是阴性就说明并没有检测到,而如果是阳性就说明在标本当中检测到了新型冠状病毒 。
2、实际上目前的核酸检测存在着假阴性的可能,也就是说即使是阴性也并不能够完全的排除患者感染 。新型冠状病毒如果是阴性,还应当隔一天之后再次采集标本,再行一次冠状病毒核酸检测,如果两次都是阴性才能够排除它的感染 。
3、假阴性与取材的标本、取材的方式都有很大的关系,如果能够采取患者下呼吸道标本,例如肺泡灌洗液、深部的痰 , 就能够明显的提高冠状病毒核酸检测的阳性率 。
核酸检测试剂盒是怎么检测,pcr核酸检测是什么意思方法及步骤

文章插图
文章插图
5、核酸自检试剂盒使用方法核酸自检试剂盒使用方法:
1、采样前:
需要检查新型冠状病毒抗原自测盒是否在有效期内,检测前仔细洗净双手 , 仔细阅读说明书,准备提取液、提取管、检测卡、采样拭子等相关物品 。
2、采样中:
测试者应微微仰头并把拭子放入鼻腔 , 慢慢推进至1.5厘米深左右,转动4圈,停留时间大于15秒,再使用同一拭子对另一侧鼻腔以同样方式采样 。如果鼻腔有黏液或者异物,可以先擤干净再进行取样 , 但不建议用水或者其他液体清洗鼻子,容易稀释样本 , 导致检测结果不准确 。
3、采样后:
采样完成后,测试者应将拭子放进提取管中,挤压、旋转拭子15秒,将拭子放进原来的袋子中并不再使用 。盖紧提取管 , 往检测卡滴加3滴提取好的样本,等待10分钟后判断结果 。
检测结果判断要求
目前批准产品均基于新型冠状病毒基因组中开放读码框1a/b(openreadingframe1ab , ORF1ab)、包膜蛋白(Envelopeprotein,E)和核衣壳蛋白(nucleocapsidprotein,N)进行选择 。
【核酸检测试剂盒是怎么检测,pcr核酸检测是什么意思方法及步骤】不同产品的检测原理基本一致,但是其引物、探针设计存在不同,有单靶区段(ORF1ab)、双靶区段(ORF1ab、N蛋白)、三靶区段(ORF1ab、N蛋白和E蛋白)的检测和判读差别 。建议使用者应严格按照不同企业说明书规定的判读方式进行判读 。

    经验总结扩展阅读