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银屑病患者血清抗致病分支杆菌抗体的检验

生活百科银屑病

银屑病至今病因不明 。有关其病因学的报道很多，迄今为止，大多报道倾向于银屑病是一种有遗传背景的与免疫有关的疾病，特别是a族溶血性链球菌超抗原与点滴状银屑病有关的观点已被大多数人所接受 。以往大多报道链球菌、葡萄球菌和糠秕孢子菌等与银屑病的相关性，而分支杆菌与银屑病的关系尚缺乏报道 。现将近年来我们的有关研究报道如下 。

银屑病患者血清抗致病分支杆菌抗体的检验

文章插图
一、材料和方法
(一)待检标本：银屑病患者63例(寻常型51例，红皮病型7例，脓疱型5例)，均为我所门诊和病房患者，除1例为78岁外，其余者为12～55岁 。采静脉血，分离血清后分装，－20℃备用 。正常人对照血清（30份）取自我所常规体检工作人员和由甘肃地方病研究所提供，年龄为13～58岁，x线胸片正常 。
(二)分支杆菌整菌抗原的制做及包被：
1.菌株及来源：人结核分支杆菌（mycobacterium tuberculosis，mtb，h37rv）引自南京市胸科医院，堪萨斯分支杆菌（mycobacterium kansasii，mk）和海鱼分支杆菌(mycobacterium marinum， mm）均引自法国巴斯德研究所 。
2.整分支杆菌抗原的制备：将上述各待试菌培养在改良罗氏培养基（lowenstein-jensen medium）上，mtb和mk于37℃孵育，mm于33℃孵育，待菌落丰富时于无菌操作条件下用白金耳将之刮下和在玻璃研磨器中研磨以分散菌团，高压灭菌后，低速离心除去未分散之菌，取上清液按吸光度值(a值)调整菌悬液浓度，并用标准阳性血清标化其包被浓度 。
3.抗原的包被：将标化的上述各分支杆菌抗原，按0.1ml/孔包被于40孔聚苯乙烯微量滴盘，37℃存放使去掉挥发缓冲液至干，待用 。
(三)间接酶联免疫吸附试验（elisa)[1]：程序简述如下：1将已包被整菌抗原的微量滴盘用ph7.4 pbs/吐温20泡30min，再用pbs/吐温20 冲洗3次；2按0.2ml/孔，加5％脱脂奶粉（sm）封闭，37℃×30min；3加以2.5％sm-pbs 做1:200稀释的待试血清0.1ml于每孔，37℃×60min；4以pbs/吐温20冲洗3次后加以2.5％sm-pbs 做1:2000稀释的hrp－羊抗人iga、igg、igm， 37℃×30min；5以pbs/吐温20冲洗3次，加底物和显色剂（opd/h2o2），37℃×30min；6以2.5n h2so4中止反应，于波长490nm处测a值 。实验设阳性及阴性对照，用空白校零点 。
(四)统计学处理：取平均a值（）=标准差（s）表示a总体均数水平和个体离散度，用walters公式设定分界值和用卡方检验各抗原间检测结果是否有差异 。
二、结果
【银屑病患者血清抗致病分支杆菌抗体的检验】 从表1可见：1在受检的各型银屑病患者均显示血清抗mtb、mm和mk抗体，从银屑病总体平均值（x）看mm(1.20)＞mtb(1.06)＞mk(0.83)；2在正常人对照血清也显示有一定量的抗体，从总体平均值看mm(0.42)＞mtb(0.39)＞mk(0.28)；3在3种分支杆菌，全部银屑病血清抗体水平与正常人之比＞2.1倍，受检的各型银屑病患者血清抗体水平亦显示同样的规律；4在红皮病型银屑病，3种抗原都显示相当高的抗体水平和高的p/n；5在mm，各型（类）银屑病均显示高抗体水平；6在点滴状和脓疱型银屑病，mtb、mk的抗体水平偏低；7在正常人对照亦显示有一定的抗体水平 。
表1　银屑病患者及正常人血清中抗3种致病分支杆菌的抗体水平
受检标准例数人结核分支杆菌海鱼分支杆菌堪萨斯分支杆菌±sp/n±sp/n±sp/n寻常型银屑病301.15±0.312.901.18±0.212.810.85±0.333.00点滴状银屑病110.85±0.352.201.16±0.252.760.70±0.352.50斑块状银屑病100.96±0.312.461.14±0.202.711.00±0.423.57红皮病型银屑病71.10±0.222.821.37±0.113.260.87±0.323.11脓胞型银屑病50.85±0.352.201.16±0.252.760.70±0.352.50银屑病合计631.06±0.342.701.20±0.242.860.83±0.352.96正常人对照300.39±0.29-0.42±0.62-0.28±0.27- 注：寻常型银屑病包括点滴状银屑病和斑块状银屑病．p/n为患者与正常人平均水平之比；＊检测28例，＊＊检测29例

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