【银屑病患者血清抗重组85复合抗原体的检测及其意义】 有关银屑病与致病性抗酸分支杆菌的相关性国外有所报道，但未见有关深入的实验研究报道 。我们已经发现在银屑病患者血清中存在着抗致病抗酸分支杆菌整菌抗体[1]，这提示致病性抗酸分支杆菌可能与银屑病存在相关性 。85复合抗原是普遍存在于抗酸分支杆菌中的一种分泌蛋白，相对分子质量约为31 000，编码此蛋白的基因dna全长约为900个碱基对[2]，具有多种生物学活性，现已证实此组抗原至少有85a、85b和85c 3种蛋白，在抗酸分支杆菌致病及发病机理中起重要的作用 。为了进一步探讨抗酸分支杆菌与银屑病的相关性，我们测定了银屑病患者血清中抗85复合抗原a（85a）和85复合抗原b（85b）抗体的水平，其结果报告如下 。
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一、材料和方法
1. 待检血清：取自本所门诊和住院的63例银屑病患者 。其中寻常型银屑病51例，脓疱型银屑病5例，红皮病型银屑病7例 。正常人对照组血清31份，取自体检合格的献血员，x线胸片均显示正常，由甘肃省地方病研究所提供 。
2. 85复合抗原：本实验所用85a和85b均为通过基因工程技术制备纯化的麻风杆菌重组融合蛋白，其制备方法参考文献[3] 。主要程序为：1诱导与表达： 将含有插入85复合抗原dna片段的质粒转化大肠杆菌后，接种在lb培养基中，37℃培养至a600值为0.5左右，加入诱导剂异丙基硫代半乳糖苷（iptg），继续培养4h；2菌蛋白提取：将培养液离心集菌后，用冻融及超声（biorutor ucd-200t:日本东湘电气公司）的方法破菌壁，释放蛋白；3重组蛋白的纯化：将粗提的菌蛋白溶液装入亲和层析柱，用洗脱液（10mmol/l麦芽糖的磷酸缓冲液）收集重组融合蛋白，测定其纯度和浓度后，置－20℃备用 。
3. 主要试剂和仪器：酶结合物hrp-iga、 hrp-igg 和hrp-igm购自美国dako公司；邻苯二胺（opd）购自美国sigma公司；dg-3022型酶联免疫检测仪购自南京华东电子管厂 。
4. 抗体检测方法：采用酶联免疫吸附试验（elisa），方法参考文献[4]，其主要程序为：1抗原包被：选用上海塑料三厂生产的40孔聚苯乙烯酶标板，将重组85a或85b蛋白按5μg/ml浓度包被，50μl/孔，37℃至干（约18h）备用；2封闭非特异性抗原：封闭液为脱脂奶粉(5％ )，0.2ml/孔，37℃反应1h；3血清反应：待检血清（1: 200稀释）0.1ml/孔，37℃反应1h；42抗反应：hrp-iga，hrp-igg 和hrp-igm （1: 1000稀释）0.1ml/孔，37℃反应1h；5显色反应：以邻苯二胺(0.04％）做显色剂和1％h2o2做底物，0.1ml/孔，37℃反应30 min后用h2so4(2.5n) 中止反应 。
5. 统计学分析：在波长为490nm处测a值，每份标本做2孔，取其平均a值做为终结果 。实验结果以 ±s表示，组间a值均数的比较采用t检验 。
二、结果
1. 各型银屑病患者血清抗85复合抗原抗体水平（见表1）：各型银屑病患者血清抗85复合抗原抗体水平均高于正常人对照组，其p/n除脓疱型近似2.0外，总体和分型者均≥2.1，经统计学检验亦均有非常显著性差异 。各型银屑病患者组之间统计学比较表明红皮病型银屑病患者血清抗85复合体a水平明显高于寻常型(t=2.24，p＜ 0.05)和脓疱型(t=2.34，p＜ 0.05)患者，而脓疱型与寻常型比较，t=0.85，p ＞0.05，无显著性差异，其抗体水平依次为红皮病型 ＞寻常型 ＞脓疱型 。85复合体b水平在各型之间比较均无显著性差异 。且在各型银屑病患者血清中抗85b抗体水平均高于抗85a抗体水平 。
表1 银屑病患者及正常人对照组血清抗85复合抗原抗体水平(a值)
组 别例 数85a85b±st值＊p值±st值＊p值正常人对照组310.06±0.03--0.08±0.05--银屑病患者组630.13±0.066.12＜0.010.17±0.114.33＜0.01寻常组510.13±0.066.04＜0.010.17±0.114.29＜0.01红皮病型70.19±0.087.01＜0.010.25±0.125.88＜0.01脓胞型50.11±0.043.75＜0.010.15±0.053.35＜0.01 注：＊分别与正常人对照组比较
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