曾广泛参考历代医药及其他有关文献八百余种，并亲自上山采药，深入民间，向渔人、农民、工人、车夫、猎人、皮工等广大群众请教，重视药物的临床作用，通过亲身服药、临床观察及有关实践，对药物进行研究、比较、分析，纠正了古代本草书籍中不少关于药物产地、品种、药名及治疗作用方面的错误 。
经过二十七年的努力，三次大的修改，著成《本草纲目》一书，并于明神宗万历十八年(1590)在南京刊行 。
贡献
其创作的《本草纲目》不仅在药物学方面成就巨大，在动物、植物、矿物、化学、地质、天文等方面都有一定的贡献 。因此此书被认为是古代的百科全书 。
李时珍除著《本草纲目》外 ， 还于明世宗嘉靖四十三年著有《濒湖脉学》，此书融会先贤脉学之精华，删繁去芜，讲求实用，归纳脉象为二十七种 。又于明穆宗隆庆六年，著《奇经八脉考》 ， 对奇经循行路线及证治规律阐发尤多 。他的其他著作还有《脉诀考证》、《五脏图论》、《命门考》、《濒湖医案》、《濒湖集简方》等 。
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