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紫外线辐射的尿刊酸对T淋巴细胞分泌IL-10的影响

生活百科尿刊酸

尿刊酸（urocanic acid，uca）存在于哺乳动物表皮角质层中，在天然情况下以反式（trans-uca）存在，当受到一定波长的中波紫外线照射后，部分异构为顺式（cis-uca） 。近年来许多研究表明尿刊酸在紫外线引起的免疫抑制中起着重要作用[1] 。为了进一步了解uca对t淋巴细胞的作用，我们观察了cis-uca和trans-uca对t淋巴细胞分泌il-10的影响，以进一步探讨尿刊酸在紫外线引起的免疫抑制中的作用机

紫外线辐射的尿刊酸对T淋巴细胞分泌IL-10的影响

文章插图

一、材料和方法
1.cis-uca的制备：先制作紫外线辐射时间对顺式尿刊酸转化率标准曲线[2] 。trans-uca（sigma）按40mg/ml浓度于37℃用二甲基亚砜（dmso，sigma)溶解，用重水（d2o，北京化工厂）稀释至1mg/ml 。取7份样品，每份2.5ml置于直径7cm的平皿中使成薄层 。将平皿置于70μw/cm2，波长297nm的紫外线（uv）下照射5min、10min、20min，30min，1h，2h，3h，然后用氢谱磁共振（mr）分析顺反转化率，绘制出照射时间对顺式转化率的曲线 。根据曲线得知照射1h后顺式转化率达到最高峰为70％ 。据此我们制备了5mmol/l的cis-uca 。
2.分离淋巴细胞：正常成人静脉血，肝素抗凝，用淋巴细胞分离液分离 。
3.il-10浓度的检测：淋巴细胞按如下分组培养，①淋巴细胞对照组，②淋巴细胞＋pha组，③淋巴细胞＋cis-uca＋pha组，④淋巴细胞＋trans-uca＋pha组，其中细胞数为1×106/ml，pha浓度为0.05mg/ml，cis-uca和trans-uca组又分为a、b、c、d4组，uca浓度分别采用1.00、0.75、0.50、0.20mmol/l，培养48h后收取上清液，用酶联免疫吸附试验（elisa，深圳晶美公司试剂盒）定量测定il-10浓度
4.统计学方法：采用配对t检验 。
二、结果
1.il-10浓度检测结果见表1 。表1结果表明cis-uca对t淋巴细胞分泌il-10有着明显的抑制作用，这种抑制作用随着cis-uca浓度的增加而增加 。配对t检验结果显示，cis-uca组（t=3.18，p＜0.05）、trans-uca组(t=2.72，p＜0.05)与pha组间差异均有显著性;cis-uca组与trans-uca组间差异也有显著性（t=2.91，p%26lt;0.05）;cis-uca组（t=2.53，p＜0.05)、trans-uca组（t=11.13，p＜0.01）、pha组（t=22.66，p＜0.01）与对照组相比差异均有显著性 。cis-uca的浓度与il?10浓度之间存在着明显的相关性（r=－0.99，tr=9.23，p＜0.01），trans-uca的浓度与il-10浓度之间无显著相关性（r=0.87，tr=2.50，p＞0.05) 。
表1　尿刊酸对人外周血t淋巴细胞分泌il-10的影响il-10浓度 。
组别尿刊酸浓度(mmol/l)1.00.750.50.2cis-uca＋pha组109.65251.19316.23512.86trans-uca＋pha组363.08478.63501.19512.86pha组*630.96537.03645.65575.44淋巴细胞对照组*87.1079.4395.5089.14 注：表中数值为il-10浓度，均为elisa复孔结果，il-10浓度单位为pg/ml 。*此二组均不加uca
三、讨论
为进一步了解尿刊酸在紫外线引起的免疫抑制作用中的机理，我们研究了顺式尿刊酸对pha刺激的外周血t淋巴细胞分泌il-10的影响 。il-10是由抗原刺激的th2细胞和b细胞分泌的重要细胞因子，它的生物学作用主要是抑制th1细胞合成il-2、il-3、tnf-β、ifn-γ等细胞因子，抑制外周血单核细胞合成gm-csf和ifn-γ，并抑制活化单一核细胞合成细胞因子和mhc-ⅱ类抗原的表达 。il-10还能诱导b细胞对mhc-ⅱ类分子的表达，增强b细胞活力和促进活化b细胞增殖及免疫球蛋白的分泌 。本研究结果表明cis-uca较trans?uca更有效地抑制t淋巴细胞分泌il-10，表明尿刊酸经紫外线辐射后异构成的cis-uca通过抑制t淋巴细胞产生il-10，通过降低b细胞对mhc-ⅱ类分子的表达，降低b细胞的活力和增殖，并抑制其免疫球蛋白的分泌，从而抑制b细胞参与的体液免疫反应 。这可能是紫外线抑制机体体液免疫的一种可能的机理 。

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