扁平苔藓发病机理不清 ， 近来有人报道扁平苔藓中的细胞凋亡较明确、典型 。过去在扁平苔藓中发现的胶样小体经研究证实为凋亡小体[1] 。抑凋亡基因bcl-2和促凋亡基因fas、bax是现今研究较多、较重要的几个细胞凋亡相关基因 。为了探讨这几种基因在扁平苔藓发病中的意义 ， 我们采用免疫组化方法检测了扁平苔藓中细胞凋亡相关基因bcl-2、fas及bax 。
文章插图
一、材料和方法
1.标本来源：采用1994～1997年我院保存的石蜡包埋组织块 。扁平苔藓12例(其中2例为色素性扁平苔藓) ， 其中男6例 ， 女6例；年龄15～63岁 ， 平均年龄31.25岁 。6例正常人皮肤组织 ， 皆取自皮肤外科行重睑术、面部美容切除术者的皮肤 ， 石蜡包埋作为对照组 。测定前先将石蜡包埋组织块作常规组织切片及he染色 ， 在光镜下核对诊断 ， 证实其病理诊断无误方采用 。
2.试剂：鼠抗人bcl-2单克隆抗体购自dako公司 ， 生物素化羊抗鼠单克隆抗体系华美生物制品公司产品 。兔抗人fas多抗、兔抗人bax多抗及链霉亲和素－生物素－过氧化酶复合物免疫组化试剂盒(简称sabc试剂盒)均购自武汉博士德生物工程公司 。
3.方法：载玻片用apes处理后干燥备用 ， 切取4～5μm厚的石蜡切片 ， 常规脱蜡水化 。bcl-2基因的检测参照abc法稍加改进 ， 阳性对照为正常淋巴结 ， 阴性对照不加一抗 。fas、bax基因的检测采用sabc法 ， 阳性对照分别为武汉博士德生物工程公司提供的fas、bax阳性对照片 ， 阴性对照为不加一抗 。
【扁平苔藓中细胞凋亡相关基因bcl-2Fasbax的检测】 4.结果判断：显微镜下观察 ， 棕黄色为阳性结果 。阳性强度判断标准如下：强阳性(+++)为50％以上细胞阳性染色；中等强度阳性(++)为25％～50％细胞阳性染色；弱阳性(＋)为25％以下细胞阳性染色；阴性(－)为细胞均无任何阳性染色 。
二、结果
6例正常人皮肤组织bcl-2基因除基底细胞部分呈阳性反应外 ， 余均阴性 。fas和bax基因6例均为阴性表达 。12例扁平苔藓组织bcl-2基因表皮均为阳性表达 ， 其中5例为弱阳性 ， 7例为中等强度阳性 ， 阳性染色主要位于棘层、颗粒层和汗腺周围 ， 同时真皮浅层淋巴细胞亦见弥漫阳性表达 。fas和bax基因在12例组织真表皮中均呈广泛阳性表达 ， 其中3例fas为中等强度阳性 ， 9例为强阳性 。5例bax为中等强度阳性 ， 7例为强阳性 。在缺少一抗的对照反应中结果均为阴性 ， 而作为阳性对照的正常淋巴结及fas、bax阳性对照片则呈广泛强阳性染色 。
三、讨论
1988年vaux等首次证实bcl-2高表达可以引发肿瘤 ， 并且发现它可以明显延长细胞的生长期 ， 而对细胞的增殖率没有明显的影响 。后来人们发现它不影响细胞的增殖率 ， 而是作为细胞凋亡的一个潜在抑制因子调节细胞死亡 。我们的实验中正常人的皮肤组织部分基底细胞bcl-2基因呈阳性反应 ， 这与国外学者的报道相符合[2] 。扁平苔藓组织病理显示在真皮浅层有淋巴细胞浸润带 。扁平苔藓中bcl-2基因阳性主要位于棘层、颗粒层和汗腺周围 ， 同时真皮浅层淋巴细胞亦见广泛强阳性表达 。bax属于bcl-2基因家族成员 ， 其功能与bcl-2相反 ， 为促凋亡基因 ， bax蛋白可与bcl-2蛋白形成异源二聚体 ， 从而抑制bcl?2的抑凋亡作用 。实验中扁平苔藓组织中促凋亡基因fas、bax均为阳性表达 ， 这与国外学者的结论一致[3] 。目前认为bcl-2基因与bax基因表达产物的比例决定着细胞是否接受死亡指令 ， 当bcl-2蛋白占优势时 ， 所有的bax被结合而剩余的bcl-2起到抑制细胞凋亡的作用 ， 细胞存活；相反 ， 当bax多于bcl-2时 ， bax蛋白介导细胞死亡[4] 。我们认为扁平苔藓中抑凋亡基因bcl-2与促凋亡基因fas、bax均具有重要意义 ， 只是促凋亡作用可能更占优势 。
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