三、讨论
鼠尾胶原在结构和抗原性方面与人体组织的ⅰ型胶原基本相同 ， 它来源广泛 ， 成分较为单一 ， 制备比较方便 ， 所以我们选用它作培养支架 。我们的研究结果显示成纤维细胞在该胶原基质中能较长时间地保持活力 ， 表明ⅰ型胶原对这类成纤维细胞的生存具有良好的支持作用 。
【真皮替代物培养模型的建立】 培养好的细胞凝胶称之为真皮替代物或类似物 ， 是进行皮肤器官型培养和制作复合皮的关键与基础 ， 因而操作者除了有过硬的无菌技术外 ， 还要有灵巧的操作技术 ， 我们的体会是：①真皮成纤维细胞、胶原和naoh的比例一定要合适 。naoh中和胶原中的醋酸 ， 使其达到正确的ph值(7.4)左右 ， 细胞才不致于死亡 ， 并有很好的生长活力 。②胶原溶液应预置于0℃冰浴中 。在常温下naoh中和胶原醋酸溶液后在2分钟内便形成了凝胶 ， 给混合细胞带来了困难 ， 而预置于冰浴中便能显著延缓凝胶的形成时间 。一般先将胶原溶液预置于冰浴中 ， 加十倍浓缩培养基混合 ， 然后去离心细胞 ， 加新生牛血清混悬 ， 再用naoh快速中和混匀胶原 ， 最后加入成纤维细胞悬液 ， 这样便可将细胞均匀地混合于胶原凝胶中 。③成纤维细胞的增生能力要强 ， 应选择传代次数较少的处于指数生长期的细胞 ， 而老化的细胞增生能力低 ， 其收缩力差 ， 制出的凝胶结构不紧密 。④渗透压要在正常范围内 ， 否则细胞不能存活 。⑤胶原浓度不能过低 ， 一般应在1mg/ml以上较好 ， 形成的凝胶厚度较厚 ， 有利于以后接种表皮细胞 。
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