银屑病患者外周血单一核细胞CD44及CD54分子的表达

2022-05-22 生活百科银屑病

我们采用流式细胞仪对银屑病患者外周血单一核细胞(pbmc)cd44及cd54分子的表达进行了初步研究，旨在探讨pbmc cd44及cd54分子在银屑病发病中的作用。

银屑病患者外周血单一核细胞CD44及CD54分子的表达

文章插图

一、资料和方法
1.观察对象：46例寻常型银屑病患者，男26例，女20例；年龄17～63岁，平均35岁；病程半个月至35年；其中进行期
附表　银屑病患者外周血单一核细胞cd44及cd54表达(±s，%)
组　别例数cd44+ cd54+±s
t值*±st值*正常人对照组银屑病组40
4613.42±3.41
30.61±5.35
17.994.75±1.02
6.27±1.745.017　进行期
静止期25
2135.16±4.13
26.06±4.726.9737.16±1.21
5.38±1.174.684　治疗前
治疗后25
2533.24±4.83
20.05±5.049.4486.98±1.54
4.96±1.724.375
*两者比较的t值，p均＜0.0125例，静止期21例。健康对照者40例，男21例，女19例；年龄18～60岁，平均34岁。两组均排除系统性疾患。抽血前2个月内均无应用皮质类固醇、免疫抑制剂及细胞毒性药物史。
2.实验方法：
(1)单克隆抗体和对照：异硫氰酸荧光素(fitc)标记鼠抗人cd44及cd54单克隆抗体，阴性对照为fitc标记羊抗鼠igg１多克隆抗体。由法国国际免疫公司生产。
(2)流式细胞仪：facscan型，美国becton-dickinson公司产。
(3)pbmc悬液：取静脉血2ml，2% edta抗凝(edta∶血=1∶9)，叠加于2ml ficoll-hypaque分离液上，离心1500r/min，15分钟，提取单一核细胞层，再以pbs 2ml漂洗，同速离心(细胞浓度10６/ml)，去上清后以70%乙醇固定，4℃保存备用。
(4)免疫荧光染色：反应前以pbs漂洗离心1次以除去固定剂，将pbmc悬液分为4管，每试管500μl，分别加入fitc标记鼠抗人cd44单克隆抗体、fitc标记羊抗鼠igg１多克隆抗体、fitc标记鼠抗人cd54单克隆抗体及fitc标记羊抗鼠igg１多克隆抗体20μl 。室温下反应20分钟，以pbs漂洗离心2次，弃上清液。
(5)流式细胞计数：上机前以标准荧光微球调整仪器，使变异系数稳定在2%左右，上机后计数2×10４个细胞，荧光强度以对数放大，光散射数据存软盘，测试完后在macintosh650计算机上用cell qutst plot软件(美国becton-dickinson公司产)分析数据。
3.统计学处理：结果中所列数据以±s表示，对方差齐者采用t检验，不齐者采用t′检验。
二、结果
【银屑病患者外周血单一核细胞CD44及CD54分子的表达】 1.银屑病患者pbmc中cd44阳性率较对照组显著增高(p＜0.01)；进行期患者pbmc中cd44阳性率明显高于静止期患者(p＜0.01) 。
2.银屑病患者pbmc中cd54阳性率较对照组显著增高(p＜0.01)；进行期患者cd54阳性细胞百分率明显高于静止期患者(p＜0.01)，详见附表。
3.经过皮质类固醇激素、活血化瘀中药、紫外线(uv-n)照射等治疗，25例患者皮疹消退，其cd44及cd54阳性细胞百分率较治疗前显著降低(p＜0.01) 。
4.将患者按病程分为3组(＜5年、5～15年、＞15年)，结果显示pbmc中cd44及cd54阳性率与病程长短无关(p均＞0.05) 。
三、讨论
cd44分子是细胞表面的整合膜蛋白，属粘附分子家族。cd44分子有几种类型，在原始的造血细胞上表达的cd44类型称cd44标准型(cd44std)［1］。已有研究表明淋巴细胞cd44std在淋巴细胞与内皮细胞(ec)粘附［2］、淋巴细胞移行、淋巴细胞生成、淋巴细胞归巢、t细胞活化［3］及释放细胞因子［1］方面具重要作用。cd44std还是透明质酸的受体［1］。业已证明透明质酸在炎性反应、血管生成等方面亦具重要作用［4］。我们的结果显示银屑病患者pbmc中cd44阳性率显著增高，且与病情有关，提示pbmc cd44分子异常可能与银屑病患者淋巴细胞浸润、细胞因子异常、血管发生(angiogenesis)等有关。

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