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顾建文，解放军306医院，整理
载体（vector），指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子 。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒 。
①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制，且对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动 。
②有多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个，如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点，可适于多种限制酶切割的DNA插入 。
③含有复制起始位点，能够独立复制；通过复制进行基因扩增，否则可能会使重组DNA丢失 。
④有一定的标记基因，便于进行筛选 。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，就可以作为筛选的标记基因 。一般来说，天然运载体往往不能满足上述要求，因此需要根据不同的目的和需要，对运载体进行人工改建 。现在所使用的质粒载体几乎都是经过改建的 。
【载体是什么意思造句 载体是什么意思】⑤载体DNA分子大小应合适，以便操作 。
基因克隆的载体类型：质粒载体，噬菌体载体，柯斯质粒载体，M13噬菌体载体，噬菌粒载体 。
载体分类
质粒载体
质粒载体是一种相对分子质量较小、独立于染色体DNA之外的环状DNA(一般有1～200 kb左右，kb为千碱基对)，有的一个细菌中有一个，有的一个细菌中有多个 。质粒能通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以独立复制，也可整合到细菌染色体DNA中，随着染色体DNA的复制而复制 。
噬菌体载体
利用噬菌体作载体，主要是将外来目的DNA替代或插入中段序列，使其随左右臂一起包装成噬菌体，去感染大肠杆菌，并随噬菌体的溶菌繁殖而繁殖 。
病毒载体
质粒和噬菌体载体只能在细菌中繁殖，不能满足真核DNA重组需要 。感染动物的病毒可改造用作动物细胞的载体 。由于动物细胞的培养和操作较复杂、花费也较多，因而病毒载体构建时一般都把细菌质粒复制起始序列放置其中 。使载体及其携带的外来序列能方便地在细菌中繁殖和克隆，然后再引入真核细胞 。现在人们还在不断寻找新的运载体，如叶绿体或线粒体DNA也有可能成为运载体 。
载体构建
一、原理
依赖于限制性核酸内切酶，DNA连接酶和其他修饰酶的作用，分别对目的基因和载体DNA进行适当切割和修饰后，将二者连接在一起，再导入宿主细胞，实现目的基因在宿主细胞内的正确表达 。
二、操作步骤
1、摇菌（制作感受态细胞备用）
取装有液体培养基的3ml试管两支（依情况而定），每管加40-100μl菌种，过夜摇 。
2、提质粒（也就是载体）
依照提质粒试剂盒中的说明书操作（根据情况最后一步洗脱时可以多洗1-2次） 。
3、酶切（双酶切产生粘性末端）
反应所需试剂 体积（单位：ul）
质粒 10
所需内切酶反应缓冲液 2
所需限制性内切核酸酶 1
H2O 7
将加好的EP管置于37℃保温1-2h 。
4、电泳检测
将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，检测酶切是否成功 。
回收胶：琼脂糖与缓冲液一比一制胶，经过切胶回收目的产物，也有目的产物纯化的功能；
检测胶：琼脂糖与缓冲液一比二制胶，为了检测目的条带与预期是否相符 。
切胶回收与产物纯化是差不多的过程，所达到的目的是一样的：切胶回收也是一种纯化过程，它能去除非目的片段，然后用回收试剂盒进行纯化，能将很不纯的DNA溶液纯化；产物纯化是将较纯的DNA溶液进一步除去多余的杂质，用纯化试剂盒，你会发现纯化试剂盒和回收试剂盒的步骤几乎一样 。
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