人体|哪些化妆品应该做透皮吸收试验？如何做？依据标准有哪些？( 二 )
简单来说 ， 扩散池法就是将人或动物的离体皮肤安装在扩散池上 ， 定时取接收液 ， 用适宜的分析方法测定有效成分的含量 ， 计算透皮速率来评价化学物的渗透特性 。 扩散池可分为静态扩散池和动态扩散池两大类 ， OECD化学物透皮吸收的体外方法测试指南适用于这两类扩散池模型 。
静态扩散池有Franz扩散池和Valia-Chien扩散池两种 ， 其中Franz扩散池为垂直式扩散池 ， 即皮肤模型将扩散装置分为上下两室（图2） ， 此种扩散池最为常用 。 体外试验可参考GB/T 27818-2011《化学品 皮肤吸收 体外试验方法》 。
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化妆品透皮吸收试验应该如何做？
参考GB/T 27818-2011《化学品 皮肤吸收 体外试验方法》 。 我们为一个要做透皮吸收试验客户 ， 推荐了体外扩散池法 。
通常体外试验用的离体皮肤有动物皮肤、离体人皮肤以及三维重组皮肤模型几大类 。 不同种属、品系的动物 ， 甚至同一动物不同解剖部位的皮肤结构均不相同 ， 因此其皮肤通透性不同 ， 各种属动物皮肤通透性顺序为：家兔>大鼠>豚鼠>小型猪>恒河猴>人 。
我们在大量化妆品透皮吸收试验研究中 ， 在这些不同的动物皮肤中 ， 猪皮肤的渗透性与人体皮肤最为接近 ， 猪的皮肤厚度与人体皮肤厚度相似 ， 且猪的体表面积大 ， 可同时采集多个标本 。
猪角质层含有与人体角质层非常相似的蛋白质成分 ， 其可变纤维密度、细胞重叠区域、真皮层胶原纤维、纤维束的结构、胶原纤维的厚度以及真皮层血管的数量、大小、分布都与人体皮肤十分相似 ， 并且许多抗体在猪皮肤上也显示出了与人体皮肤相似的免疫活性 。 因此我们制定的方案就是使用巴马香猪的离体猪皮来进行 。
Franz扩散池试验方案
1.实验耗材与试剂
1.1 仪器
紫外分光光度计；改进Franz扩散池（扩散面积4.52 cm2 ， 接受室体积13 mL）；超级恒温水浴装置及磁力搅拌器 。
1.2 试剂
0.15%浓度RHC（重组胶原蛋白） ， PBS 。
1.3 动物
实验用小型乳猪（巴马香猪 ， 体重约7 kg）
2.实验方法与步骤
2.1离体猪皮的制备
巴马香猪处死后立即用电动剪毛刀剪去腹部皮肤毛 ， 剥离去毛部位皮肤 ， 去除皮下组织后用生理盐水冲洗干净 ， 置于生理盐水中浸泡约30 min ， 取出 ， 用滤纸吸干 ， 备用 。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备：精密称取RHC对照品适量 ， 置50 mL容量瓶中 ， 加5 mL磷酸缓冲液进行溶解 ， 用水稀释至刻度 ， 摇匀 ， 精密量取2mL ， 置100mL量瓶中 ， 用水稀释至刻度 ， 摇匀 ， 制成每1mL中含0.2mg的溶液 ， 即为对照品溶液（RHC浓度为0.2mg/mL） 。
2.2.2 样品溶液的制备（透皮性试验）：取出储备猪皮 ， 解冻 ， 生理盐水洗净 ， 将其夹在接受室和供给室之间 ， 皮肤外层表皮朝向供给室 ， 调整水温系统温度为32±1℃ ， 搅拌速率为200 r/min ， 在接受室加入预温32±1℃的PBS溶液 ， 将气泡全部排出 ， 将猪皮内层表面与接受液接触 ， 再将1mg /mL的RHC溶液注入供给室紧贴于猪皮表面 ， 于0.5h、1h、2h、4h、12h后用注射器吸取接受液适量 ， 孔径为0.45m的滤膜进行过滤 ， 取滤液作为样品溶液 。
2.2.3 空白基质液的制备：取空白基质适量 ， 加入至注入室 ， 0.5h、1h、2h、4h、12h后分别取接收液适量 ， 孔径为0.45 m的滤膜进行过滤 ， 取滤液作为空白基质液 。
2.3 HPLC分析
分别取上述对照品溶液、样品溶液、空白基质液进行HPLC测定 ， 波长范围220 nm 。
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