系统性红斑狼疮(sle)的主要死亡原因之一是狼疮肾炎,目前以皮质类固醇和免疫抑制剂为主要治疗手段,但两者均有严重的不良反应 。故有必要探讨新的有效而不良反应较轻的治疗手段 。我们应用单味大黄、黄芪和两药混合剂治疗bxsb小鼠,观察相关实验室指标的变化,以了解两药单用或混合应用对鼠sle的治疗作用和对人类sle的应用前景 。
文章插图
一、材料和方法
(一)材料:
1.实验材料:选择2月龄bxsb雄鼠36只,体重18~22g 。饲养在本院动物室层流柜中 。
2.药物:①中药:大黄(rheumpalmatuml)产于甘肃,黄芪(astragalusmongholicusbunge)产于内蒙古 。两药均在本实验室自制成煎剂 。煎制方法采用传统中药煎制法[1] 。配制黄芪煎剂(相当1g/ml生药黄芪),大黄煎剂(相当1g/ml生药大黄),混合煎剂(相当生药黄芪1g/ml,大黄0.5g/ml)置于4℃冰箱中保存备用 。②地塞米松(dxm)注射剂:扬州制药厂生产 。③环磷酰胺(ctx)注射剂:天津金世化工制药有限公司生产 。
3.试剂:①考马斯亮蓝:美国fluka公司生产 。②标准白蛋白:武汉生物制品研究所免疫室提供 。③fitc标记的羊抗鼠igg:武汉生物制品研究所免疫室提供 。④0.01mol/l磷酸缓冲液(pbs) 。
4.仪器设备:精密天平,721分光光度计,水浴箱,荧光显微镜,鲍金7000生化自动分析仪 。
(二)方法:
1.给药方法:bxsb雄鼠36只,随机分成6组,每组6只 。第1组:黄芪组;第2组:大黄组;第3组:混合剂组;第4组:地塞米松组;第5组:环磷酰胺组;第6组:空白对照组,给予等量生理盐水灌胃和等量注射用水腹腔注射,每日1次,上述各组连续用药3个月 。
2.实验室指标检测:尿蛋白含量:用尿蛋白定量考马斯亮蓝染料法检测;血清抗核抗体(ana):间接免疫荧光法检测;血清尿素氮(bun)和血肌酐(scr)水平:酶法在鲍金生化自动分析仪上检测;肾脏免疫病理及观察:新鲜小鼠肾脏冰冻切片后,直接免疫荧光法观察肾脏免疫沉积情况 。
二、结果
1.尿蛋白含量检测:见表1 。5月龄bxsb雄鼠肾功能明显异常,与对照组比较中药能减轻其损害(p<0.01),且中药各组与地塞米松组和ctx组间差异无显著性0.05) 。
表1 bxsb小鼠尿蛋白含量、血清ana水平检测结果(6只)
组别剂量(g·kg-1·d-1×90d)途径尿蛋白量(mg/l) 血清ana水平 ±stt值±stt值黄芪组1.8灌胃1492.9±66.722.45*1.230±0.3163.98*大黄组0.6灌胃1811.6±654.13.01*1.178±0.2464.97*混合组1.7灌胃1542.5±333.34.76*1.129±0.2963.91*地塞米松组0.001腹腔注射1645.8±236.66.98*0.778±0.3012.85**环磷酰胺组0.025腹腔注射1667.0±201.88.76*1.230±0.2524.89*空白对照组--3227.6±655.0-1.899±0.517- 注:与空白对照组比较,*p<0.01,**p<0.05;各用药组两两比较,差异均无显著性 。血清ana水平值为其滴度的对数
2.血清ana水平检测:见表1 。5月龄bxsb雄鼠免疫系统明显异常,而中药、地塞米松、ctx均显著降低ana水平(p<0.05),且各用药组间差异无显著性0.05) 。
【大黄和黄芪】 3.血清bun和scr水平:见表2 。5月龄bxsb雄鼠肾功能损害明显,而中药、地塞米松、ctx均对肾功能有显著改善作用(p<0.05),且各用药组间差异无显著性0.05) 。
表2 bxsb小鼠血清尿素氮和血肌酐水平(6只)
组别剂量(g·kg-1·d-1×90d)途径尿素氮(mmol/l)血肌酐(umol/l)±stt值±stt值黄芪组1.8灌胃6.42±1.265.2076.19±21.403.65*大黄组0.6灌胃6.83±1.265.62**93.28±11.248.68*混合组1.7灌胃6.96±0.1449.98**68.39±3.0622.53*地塞米松组0.001腹腔注射5.89±0.797.64**96.40±12.547.96*环磷酰胺组0.025腹腔注射5.99±0.867.16**111.30±12.408.96*空白对照组--8.84±1.35-145.44±17.40- 注:与空白对照组比较,*p<0.01,**p<0.05;各用药组两两比较,差异均无显著性 。
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