银屑病是一种皮肤表皮细胞良性增生性疾病,其发病机理仍不清楚 。近年来发现ras基因和p53基因与肿瘤细胞的增生有关[1~3] 。为探讨ras基因和p53基因与银屑病皮损发生、发展的关系,我们分别对13例银屑病患者皮损内ras基因表达的p21蛋白和p53基因表达的p53蛋白进行了免疫组化研究 。
文章插图
一、病例和方法
1.病例资料:随机选择1996年5~12月门诊就诊的13例进行期斑块状银屑病患者,其中男8例,女5例;年龄19~50岁;病程半年至10年 。诊断依据临床表现及组织病理学检查 。4例正常人对照来自皮肤外伤患者创口周边外观正常皮肤 。
2.试剂:鼠抗人多克隆p21抗体、鼠抗人p53单克隆抗体均为美国santa cruz公司产品,批号分别为sc817、sc126 。链霉亲和素-生物素化过氧化物酶复合物(sabc)试剂盒由武汉博士德生物工程公司提供 。防脱片剂apes为sigma公司产品 。
3.免疫组化染色:载玻片先以apes处理,石蜡包埋组织连续制厚4~5μm的切片 。切片经脱蜡、水化,再以3% h2o2灭活内源性酶,微波修复抗原及正常山羊血清分别处理标本,然后分别滴加p21和p53单抗(稀释度均为1∶50),4℃过夜,先后滴加生物素化二抗及sabc复合物 。以上每一步骤前均以0.1mol/l pbs缓冲液(ph7.4)充分浸洗标本,最后dab显色,苏木素轻度复染、脱水、透明、封片 。每次实验均用已知阳性片作阳性对照,以pbs代替一抗作阴性对照 。
4.判断标准:①p21蛋白表达:免疫组化染色阳性为棕黄色,不着色为阴性;p21蛋白定位于胞浆及胞膜 。②p53蛋白表达:染色阳性为棕黄色,不着色为阴性;p53蛋白定位于细胞核 。参照garcia[4]的判断方法,确定上述二种蛋白阳性反应细胞的半定量分级:细胞浅棕黄色为1,深棕黄色为2;阳性细胞比例<20%为1,20%~50%为2,50%以上者为3 。上述两项相加等于2~2.9者为弱阳性(+),3~3.9者为阳性(?),≥4者为强阳性(?) 。
二、结果
正常人皮肤表皮中未见p21蛋白和p53蛋白表达 。13例银屑病患者皮损中全部出现p21蛋白阳性染色,其中p21阳性4例,强阳性9例,阳性细胞弥漫分布于除角质层外的表皮全层细胞(图1) 。但是,13例进行期银屑病患者皮损中p53蛋白表达全部阴性 。p21蛋白和p53蛋白的阳性对照均为棕黄色阳性细胞,阴性均无棕黄色着色 。
三、讨论
本研究表明,在正常皮肤表皮中p21蛋白和p53蛋白表达均为阴性 。而在13例进行期银屑病患者皮损中,p21则全部出现阳性表达,除角质层外,阳性细胞弥漫分布于基底层及棘细胞层 。p21过度表达提示其参与银屑病患者皮损角朊细胞增殖、分化的调节,并与银屑病皮损角朊细胞的过度增生及分化密切相关 。本研究未
图1 银屑病皮损表皮细胞p21蛋白
强阳性表达(×20)
【p21与p53蛋白在银屑病皮损中的表达】 能检出p53蛋白在银屑病皮损内的表达,而且13例皮损中全部阴性 。说明p53蛋白对银屑病皮损的发生影响不大 。
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