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小番健康 乙肝药物研发实验，通过终点稀释法，确定一类新型抑制剂


小番健康 乙肝药物研发实验，通过终点稀释法，确定一类新型抑制剂
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小番健康 乙肝药物研发实验，通过终点稀释法，确定一类新型抑制剂

韩国四所科研院校研究人员 ， 在开发检测方法过程中 ， 鉴定出了一种新的乙肝病毒抑制剂 ， 并将研究成果发表在Antiviral Research 。
简单来讲 ， 韩国研究人员鉴定并发现一种α-2 肾上腺素受体激动剂——右美托咪定 (DMM) ， 在实验中 ， 它在不干扰HBVDNA分泌的前提下 ， 可抑制传染性病毒后代的分泌约6倍！
乙肝药物研发实验 ， 通过终点稀释法 ， 确定一类新型抑制剂
一、实验目的
韩国研究人员认为 ， 定量传染性病毒颗粒是进行体外病毒学研究基础 。 为了确定体外含乙肝病毒（HBV）基因组颗粒的数量 ， 使用定量PCR（qPCR）测量基因组当量（GEq） 。 然而 ， 除了传染性病毒粒子以外 ， 体外还会产生含有HBVDNA的非传染性HBV颗粒 ， 这种背景下 ， 可能导致在通过 qPCR分析时 ， 高估传染性HBV颗粒的数量 。
二、实验方法
因此 ， 基于上述原因 ， 韩国研究人员建立了一个终点稀释法 ， 可以精确地确定传染性HBV颗粒的数量 。 基于HBV感染细胞模型测定使用384孔板格式 ， 并能够以半自动式计算50%组织培养感染剂量（TCID50） 。
细胞培养衍生的HBV（HBVcc） ， 由稳定的HBV复制细胞（HepAD38）或HBV感染的HepG2-NTCP 细胞产生 ， 以及来源患者的HBV血清被连续稀释并用于感染初始靶细胞 。 应用终点稀释试验 ， 韩国研究人员用源自HepAD38-和 HepG2-NTCPsec + 细胞上清液的PEG 沉淀 HBV 感染 HepG2-NTCP 细胞 ， 计算 TCID50/mL ， 转化为空斑形成单位 (PFU) ， 并产生特异性传染性（PFU/GEq 的比率） 。
结果 ， 计算出 HepAD38 和 HepG2-NTCPsec + 细胞上清液的 TCID50/mL 分别为 7.22×106 和 2.16×106 ， 比感染力分别为 1/13816 和 1/8798 。 通过免疫沉淀去除非感染性“裸露”颗粒后 ， 特异性感染性进一步增加了大约2倍 。
通过肝素柱纯化 HepAD38 细胞上清液后 ， TCID50/mL 和特异性感染率分别提高了18倍和15倍 。 有趣的是 ， 来自两名未纯化患者的HBV血清具有1/88 和 1/3609 的特异性传染性 。 在将TCID50 转换为感染复数 (MOI) 值后 ， 研究人员根据GEq 或 MOI 值用 HBVcc 接种 HepG2-NTCP细胞 ， 并证明基于 MOI 的感染导致更可重复的感染率 。
三、实验结论
此外 ， 该测定使用连续稀释的拉米夫定（一种乙肝病毒复制抑制剂）进行验证 ， 可抑制HBVDNA分泌和传染性病毒后代约分别是56倍和470倍 。 韩国研究人员发现 ， 我们鉴定了右美托咪定 (DMM) ， 它是一种α-2 肾上腺素能激动剂 ， 可以抑制传染性病毒后代的分泌约6倍 ， 而不会干扰HBVDNA分泌 。
综上所述 ， 韩国研究人员这项科学实验的结果是 ， 开发了一种适用于传染性HBV颗粒的标准定量检测方法 ， 将右美托咪定 (DMM)鉴定为一种新型乙肝病毒抑制剂 ， 它能够专门干扰传染性HBV颗粒的分泌 ， 而并不会影响乙肝病毒基因组的分泌 。
四、实验意义和药物开发前景
【小番健康 乙肝药物研发实验，通过终点稀释法，确定一类新型抑制剂】小番健康结语：总体来看 ， 韩国四所科研院校研究人员的这项研究成果 ， 要点包含两个方向 ， 第一是开发这种终点稀释法 ， 能够精确测定感染性HBV颗粒的数量 ， 可以评估HBV颗粒的特异性感染性和稳定性；第二是 ， 通过这种方法 ， 鉴定出了一种新型HBV抑制剂（即右美托咪定 (DMM) ， 以往它主要作为α-2 肾上腺素受体激动剂） ， 研究结果已发表在Antiviral Research 。

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