乳房paget病(mpd)是一种特殊类型的皮肤肿瘤，患者往往合并下方乳腺癌[1] 。近年来，乳腺肿瘤组织中癌基因、抑癌基因以及凋亡相关基因研究报道日益增多，揭示乳腺癌的发生发展涉及到上述基因之间的相互作用[2] 。我们采用sp免疫组化方法，观察bcl－2、bax在mpd及其下方乳腺癌中的表达，并与雌激素受体（er）、孕激素受体（pr）的表达情况进行比较，旨在探讨凋亡相关基因与mpd的发病关系以及mpd与下方乳腺癌之间的关系 。
文章插图
一、材料与方法
1.标本：mpd患者26例，均为女性，年龄30～77岁，平均诊断年龄56.5岁 。左侧乳头及乳晕病变14例，右侧乳头及乳晕病变12例 。正常人对照5例，取自成人躯干部，为外科整形切除多余之皮肤标本 。
2.试剂：第一抗体抗bcl－2（n－19）和抗bax（n－20）抗体为兔抗人多克隆抗体；第一抗体抗er和抗pr抗体为鼠抗人单克隆抗体 。所有抗体均为美国santacruz公司产品，购自北京中山生物技术公司 。
3.标本均经3.33mol/l(10％)中性福尔马林固定，石蜡包埋 。连续组织切片厚4μm，分别进行he染色及免疫组化染色 。免疫组化步骤：脱蜡至水后加枸橼酸缓冲液10mmol/l（ph6.0）95℃10min，正常羊血清封闭15min，分别加入4种一抗（浓度均为1∶100），室温孵育4h，加生物素－sp标记二抗，室温孵育30min 。dab显色，苏木素复染封片 。上述各步骤间均用pbs洗涤3次，每次5min 。用已知阳性切片作阳性对照，以pbs代替一抗作阴性对照 。
4.结果判断标准：根据paget细胞及乳腺癌细胞着染数目及染色深浅分别记0～3分 。着染细胞数目超过肿瘤细胞数＞50％3分，25％～50％2分，5％～24％1分，＜5％为0分 。染色深度以多数细胞的呈色反应为准：深棕色为3分，棕黄色2分，淡棕色1分，不着色0分 。上述2项指标积分数分4级：强阳性（＋＋＋）5～6分，阳性（＋＋）3～4分，弱阳性（＋）2分，阴性（－）0分 。5.统计学处理：采用计算机spss统计软件包的联列表资料χ2检验法 。
二、结果
1.病理形态：所有病例均在表皮见到典型paget细胞 。5例为单纯mpd，21例系mpd合并下方乳腺癌，其中浸润性导管癌10例，单纯癌4例，导管内癌7例 。高分化者16例，大多数paget细胞核淡染居中，核浆比例小，分裂象少见，paget细胞呈散在或小巢状分布；低分化者10例，多数paget细胞核深染偏位，细胞呈印戒状，分裂象易见，细胞呈巢或呈腺泡或腺管状结构 。
2.免疫组化染色结果：bcl－2和bax阳性染色以细胞浆为主，呈棕黄色颗粒着色；er、pr阳性染色为细胞浆及细胞核棕黄色颗粒着色 。26例mpd中，bcl－2蛋白表达阳性16例，阳性率为61.5％；bax蛋白表达阳性19例，阳性率为73.1％；er阳性18例，阳性率69.2％；pr阳性17例，阳性率65.4％，详见表1 。一些病例paget细胞同时表达2种或2种以上蛋白，paget细胞同时表达bcl－2与bax或er或pr蛋白情况详见表2 。
21例paget病合并下方乳腺癌，其乳腺癌细胞bcl－2、bax、er和pr的表达阳性率分别为81.0％、85.7％、71.4％和71.4％ 。
正常人皮肤基底细胞可见bcl－2阳性表达，其上方角质形成细胞则呈阴性表达，而bax阳性表达见于表皮上层邻近角质层及角质层 。正常皮肤角质形成细胞及大小汗腺均不表达er、pr 。
表1bcl－2、bax、雌激素受体和孕激素受体在乳房paget病中的表达
组 别例数bcl－2bax雌激素受体孕激素受体-＋＋＋＋＋＋-＋＋＋＋＋＋-＋＋＋＋＋＋-＋＋＋＋＋＋高分化组1638505641311114921低分化组107300244053115410合 计26101150710818142291331 表2 乳房paget病中bcl－2分别与bax、雌激素受体、孕激素受体同时表达(％)
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