为了探讨中药对沙眼衣原体(ct)的体外敏感性试验方法，我们利用组织细胞培养技术测定了3种中药合剂对41株ct临床分离株的体外敏感性 。现将实验结果报道如下 。
文章插图
一、材料和方法
(一)材料：①实验菌株：所有菌株均采自我院性病中心非淋菌性尿道炎(ngu)患者泌尿生殖道，经分离、纯化而得 。②细胞株：mccoy细胞：由美国标准菌库(atcc)提供，本室保存传代 。3培养基的制备：参照文献[1]方法，略加改进 。
(二)药物和方法：
1.药物来源：根据ngu的3种病征配制3种中药合剂，所有中药均购自于广州市中药材公司 。①中药合剂ⅰ：由黄柏(宁夏)、山栀子(云南)、连翘(河南)、大黄(四川)等组成 。②中药合剂ⅱ：由柴胡(宁夏)、川楝子(四川)、车前子(江西)、龙胆草(黑龙江)等组成 。③中药合剂ⅲ：由干地黄(河南)、金樱子(广东)、萆解(四川)、黄柏(宁夏)等组成 。
2.药物的配制与保存：水提法配制[2] 。中药经品种鉴定、粉碎、浸泡、煮沸、浓缩和过滤等过程，最后用蒸馏水调节所需浓度至1∶1(即1ml煎液相当于1g中药合剂)，调节ph至7.2，置－20℃，保存期3个月 。
3.沙眼衣原体的计数方法：参照wentworth[3]方法 。
4.体外试验[4，5]：①菌液的稀释：将冻存的分离株用运送培养基(2sp)作不同浓度的稀释，接种，以确定能产生多于4.5×103包涵体形成单位(ifu)/孔的接种浓度 。②药液工作浓度滴定：按预试验测定的最低抑菌浓度，以此为中间值滴定9个等比稀释度，用时以无菌营养液稀释 。③抑菌浓度的测定：在96孔板中，培养mccoy细胞24h，使之致密单层，按确定接种量加入待检分离株，35℃、2 000g离心1h，继续37℃ 5％ co2孵育1h，弃上清液，每孔加入0.1ml无抗生素含放线菌酮之营养液，同时加入等比稀释之药液0.1ml于各孔，每个滴定度设复孔，继续37℃ 5％ co2培养48h，弃上清液，甲醇固定，碘染色判断结果 。镜下复孔均未见包涵体之最低稀释度为mic；复孔平均包涵体细胞计数近于无药对照的50％为mic50 。
5.杀菌浓度的测定：①最低杀菌浓度ⅰ(mbcⅰ)：按上述方法设复板，一块染色读取mic，另未染色板直接读取mic孔细胞，弃上清液，用2sp洗涤2次，收集其未生长孔细胞继续盲传1代，48h后同前染色观察结果；以未见包涵体的最低稀释度孔浓度为mbcⅰ 。②最低杀菌浓度ⅱ(mbcⅱ)：按前述方法，不同的是在接种、离心、孵育24h后，加入不同稀释度的药液，测定得到的最低杀菌浓度为mbcⅱ 。
6.对照分组：①药物处理组：把不同稀释度的药液0.1ml加入mccoy细胞中，培养48h，以确定药液是否存在细胞毒作用 。②无药(空白)对照组：加入已确定接种量的菌液，不加药液，与试验组同时进行 。③2sp对照组：用2sp液取代药液，观察2sp对沙眼衣原体生长的影响 。④蒸馏水对照组：以蒸馏水代替药液，观察蒸馏水对沙眼衣原体生长的影响 。
二、结果
(一)药物对41株沙眼衣原体分离株的抑菌作用：见表1 。
表1 3种中药合剂对41株沙眼衣原体分离株的抑制作用结果
中药 合剂药物浓度抑菌浓度31.2515.607.803.901.950.98范围mic50micⅰ2（1）15（10）15（17）8（9）1（3）0（1）0.98～31.257.069.10ⅱ10（4）25（15）4（14）1（5）1（3）0（0）1.95～31.259.5715.89ⅲ10（3）27（18）3（15）0（3）1（1）0（1）0.98～31.2510.2416.43
注：表内为抑菌数，括号内为mic50抑菌数
(二)3种中药合剂在不同给药时间杀菌作用的关系：见表2 。
表2 3种中药合剂不同给药时间对沙眼衣原体分离株杀菌活性的比较（mg/ml）
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