为了解人乳头瘤病毒(hpv)及其型别在本地区高危人群中的流行情况，我们采用hpv的共同引物(general primer，gp)对41例性罪错妇女、46例对照组宫颈标本进行聚合酶链反应(pcr)检测，再用型特异性引物(sp)6、11、16、18对gp-hpv阳性标本进行扩增分型，现报道如下 。
文章插图
一、材料和方法
1.标本来源：于1996年12月，随机选择温州市妇女劳教所性罪错妇女41例，年龄18～40岁，刮取宫颈脱落细胞标本，共41份；同时随机选择本院附属二院妇科门诊要求体检的育龄妇女46例，作为正常人
表1 各组生殖道标 本hpv及其型别检出结果
组别例数gp-hpv(+)各型hpv检出数多重型别检出数 (二型以上)例数%6111618其它性罪错组412663.45771468正常人群组4636.5001020
χ2=31.58，p＜0.01
表2 性罪错妇女性 伴数与生殖道hpv及其型别的检出关系
性 伴数例数gp-hpv(+)各型hpv检出数多重型别检出数 (二型以上)例数%6111618其它2～1015640.004112111～30151066.722452531～111090.9312822
χ2=7.20，p＜0.05 群对照 。
2.标本处理：脱落细胞标本用ph7.0、66mmol/l的pbs缓冲液洗涤、离心，经蛋白酶k 55℃ 作用3小时后，于95℃ 10分钟灭活，收集离心后上清液，-20℃保存备用，作为pcr模板。
3.引物合成：本研究hpv引物由美国loyola大学医学研究中心周健博士惠赠，gp扩增139-14 5bp，序列为：5′-tttgttactgtggtagatac-3′、5′-ga
aaaataaactgtaaatca-3 ′；sp6扩增28 0bp，序列为：5′-tttgttactgtggtagatac-3′、5′-gaaaaataaactgtaaatca -3′；sp11扩增3 60bp，序列为：5′-ggaatacatgcgccatgtgc-3′、5′-cgagcagacgtccgtcctcg-3′；sp 16扩增 152bp，序列为：5′-tgctagtgcttatgcagcaa-3′、5′-atttactgcaacattggtac-3′；s p1 8扩增216bp，序列为：5′-aaggatgctgcaccggctga-3′，5′-cacgcacacgcttggcaggt-3 ′ 。
4.pcr操作：每50μl反应体系中，含引物50μmol/l，dntp 200μmol/l，taq酶1.5u，模板用量10μl；反应步骤为92℃ 60秒变性，55℃ 120秒复性，72℃ 90秒引物延伸，共进行35个循环 。扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭染色，在紫外反射仪下观察记录 。
5.数据统计：各组别hpv检出率的比较，采用χ2检验 。
二、结果
1.pcr扩增产物分析：gp、sp6、sp11、sp16、sp18五组引物均能准确扩增出相应的扩增产物，反应结果清晰易辨，见图1 。
2.各组标本hpv及型别阳性检出率见表1 。性罪错组hpv阳性检出率 (63.4%)较对照组(6.5%)有显著性差异(χ2=31.58，p＜0.01)；hpv 型别以18型检出为多见，占hpv阳性的53.8%(14/26)；二型以上的多重型别检出率为30.8% (8/26)，其中hpv16+18、6+18、6+16+18、6+11+16+18各1例，11+16、6+11+18各2例 。
3.性伴数与hpv及其型别的检出关系见表2 。随着性伴人数(据受检者主诉)
1、3、5、7、9分别为sp6 、sp11、sp18、sp16、gp五组引物扩增的hpv阳性对照；2、4、6、8、10分别为相应引物扩增的hpv阳性标本；11、12为gp引物扩增的阴性标本
图1pcr扩增产物分析
的增加，hpv的阳性检出率呈上升趋势，经检验有显著性差异(χ2=7.20，p＜0.05)；尤以hpv18的阳性检出率随性伴数增高而增高(χ2=12.32，p[ wtbz ＜0.01) 。
三、讨论
近年来研究已表明，hpv是std病原之一，其某些型别与宫颈上皮的不典型增生及宫颈癌发生发展相关 。通常认为hpv16和18是致癌的高危型别，而hpv6、11则是致癌的低危型别 。国外学者对hpv与性传播的相关性作过许多研究，发现hpv是妇女生殖道最常见的std病原 。baken 等［1］报道采用pcr方法检测hpv，在std门诊女性患者中阳性检 出率高达72% 。本文性罪错妇女宫颈hpv的阳性检出率为63.4%，高危型别的检出占hpv阳性 的80.5%(21/26)，尤以hpv18型的检出为高，占其中的53.8%(14/26) 。表明性罪错人群hpv 感染以高危型别、尤其18型为主 。
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