随着免疫组化技术的建立和成熟，用酶标抗体代替荧光抗体，就能用普通光学显微镜读结果 。我们依据免疫组化的理论，按fta－abs试验的原理建立了eta－abs－igg试验，使梅毒螺旋体抗原染成棕黄色（dab显色）或红色（aec显色），阳性标本在普通显微镜下清晰易辨 。此外我们还用236例性病门诊患者血清平行配对做eta?abs?igg试验及tppa、rpr试验，现将eta?abs?igg试验的步骤及实验结果报道如下 。
文章插图
(一)材料：
1.病例选择：病例样本取自北京市性病防治所1997～1998年门诊患者血清共236份，56℃30min灭活补体后－20℃冷冻备存 。样本中男159例、女77例 。按卫生部疾病控制司梅毒诊断标准[1]，临床排除梅毒的108例，临床诊断梅毒的128例，其中一期梅毒40例，未治疗33例，治疗7例；二期梅毒56例，未治疗27例，治疗29例；早期潜伏梅毒18例，未治疗12例，治疗6例；病期不详的14例 。年龄（31.56±7.12）岁 。
2.试剂：fta?abs试剂盒、nichols标准梅毒螺旋体毒株抗原片，螺旋体reiter株培养液吸收剂，均由军事医学科学院五所一室提供 。生物素标记羊抗人igg（22506），hrp－链霉亲和素（d1030、f0811），封片剂clearmount以及封闭用正常羊血清均购自北京中山公司 。tppa试剂盒为日本富士产（vn80602），rpr试剂盒为新疆新地公司产 。
3.自配试剂：pbs（ph7.4，0.01mol/l），醋酸缓冲液（ph5.2，0.15mol/l），封闭剂（10％正常羊血清的pbs），样本稀释剂（1％bsa，10％正常羊血清，0.02％吐温20的pbs），清洗剂（含0.08％吐温20的pbs），酶稀释剂（1％bsa，10％正常羊血清，0.04％吐温20），dab（dab2.5mg，10mlpbs，0.1ml3％过氧化氢），aec（4mgaec，1ml二甲基甲酰胺，14ml醋酸缓冲液，0.15ml3％过氧化氢） 。
（二）方法：
【梅毒螺旋体抗体吸收试验ETAABS-gG的建立】 把梅毒螺旋体nichols标准毒株兔睾丸接种培养，离心获梅毒螺旋体作为抗原固定于载玻片上 。用已灭活血清和样本稀释剂1∶20稀释，再与吸收剂1∶1混合使最终样本稀释度为1∶40，然后37℃20min孵育，以去除交叉抗体 。与此同时抗tp抗原片加20μl封闭剂37℃20min，以封闭空白位点 。将已吸收的血清20μl加在抗原片上，37℃30min湿盒孵育，使tpigg抗体与抗原结合 。用清洗液浸泡清洗5min2次，期间提插抗原片数次，以洗去未结合的抗体 。把1∶400稀释的生物素化羊抗人igg抗体20μl加在抗原片上，37℃20min，使其与抗tpigg抗体结合 。重复浸泡清洗5min2次 。加1∶100稀释的hrp－链亲和素20μl，37℃20min，浸泡清洗8min2次 。最后加底物dab/aec，结合上的hrp使dab氧化呈棕黄色，aec呈红色 。aec显色后需用封片剂clearmount封片 。
tppa及rpr均按试剂盒说明的步骤进行 。eta?abs?igg试验的判断结果为：阳性标准：光镜下（×400）可见染成棕黄色或红色的梅毒螺旋体，油镜下（×1000）可见梅毒螺旋体呈细丝状，两头尖，中间有排列均匀螺旋的典型形态；阴性标准：油镜下（×1000）未发现染色的梅毒螺旋体；可疑标准为：dab染色中，高倍镜下（×400）可见染成棕黄色的螺旋体，但油镜下（×1000）螺旋体形态不清晰 。由于dab显色呈棕黄色，当血清中抗tp抗体滴度低到一定水平，dab显色浅，结果与某些显微镜的黄光背景不易区分，所以先用dab染色，对其中可疑病例再用aec染色确定 。
本研究用北京市性病防治所1997～1998年门诊患者血清236份，平行配对由两人分别做eta?abs?igg及tppa、rpr，数据用spss软件作配对χ2检验 。
二、结果
用我们建立的eta?bas?igg试验的方法检测血清中抗tpigg抗体，阳性结果十分清晰易辨，在油镜下（×1000）可以清楚地看见tp的典型形态 。对236例样本的配对检测结果见表1、2 。
经验总结扩展阅读
- 先天性梅毒三例
- 晚期皮肤梅毒伴心血管梅毒一例
- 早期梅毒误诊39例临床及病理分析
- 早期梅毒暗视野检查梅毒螺旋体和梅毒血清试验的结果分析
- 用ND-O-BSA-ELISA检测小鼠血清中抗麻风杆菌IgM抗体的研究
- 系统性红斑狼疮患者抗中性粒细胞胞浆抗体的检测
- 天疱疮抗体结合靶抗原的定位研究
- 自身免疫性大疱病IgA型基底膜带抗体的分析
- 梅毒疫情趋于女性病例数增长幅度高于男性
- 抗体脸部换季过敏怎么办！-协和敏芙霜