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凋亡调控蛋白在银屑病患者外周血淋巴细胞中的表达

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【凋亡调控蛋白在银屑病患者外周血淋巴细胞中的表达】 有资料表明 ， 淋巴细胞凋亡发生异常是导致免疫紊乱和一些疾病发生的重要原因[1] 。我们应用流式细胞计数分析了凋亡调控蛋白apo-1、apo-2.7和bcl-2在银屑病患者外周血淋巴细胞(pblc)中的表达 ， 旨在从凋亡的角度探讨银屑病的免疫发病机制 。

凋亡调控蛋白在银屑病患者外周血淋巴细胞中的表达

文章插图

一、病例和方法
(一)病例：寻常型银屑病患者30例 ， 男26例 ， 女4例；年龄21～56岁 ， 平均33.3岁；病程1个月至15年 ， 平均3年 。所有患者均于治疗前后即进行期和缓解期各抽血1次 ， 抽血前均以pasi给患者的病情程度计分[2] 。健康对照20例 ， 男17例 ， 女3例；年龄20～52岁 ， 平均35岁 。
(二)实验方法：
1.试剂及来源：异硫氰酸荧光素标记的apo-1和bcl-2单克隆抗体(apo-1-fitc、bcl-2-fitc)及藻红蛋白标记的apo-2.7单克隆抗体(apo-2．7-pe)均由法国国际免疫公司生产；淋巴细胞分离液由中国医学科学院血液学研究所生产 。
2.样品处理：晨取肘静脉血2ml ， 2％ edta抗凝并悬浮于淋巴细胞分离液上 ， 1500r/min离心15min ， 提取其中的淋巴细胞 ， 加pbs 2ml漂洗 ， 同速离心弃上清液 ， 备用 。
3.免疫反应：反应前调整细胞数至109/ml ， 分别取100μl样品放入3支试验管和3支对照管 ， 试验管分别加20μl apo-1-fitc、bcl-2-fitc和apo-2．7-pe 。对照管分别加20μl igg1-fitc、igg1-fitc和igg1-pe ， 室温避光反应30min ， 上机 。
4.流式细胞检测：仪器为facscan型 ， 美国becton-dickinson公司产品 。上机前先用标准荧光微球调整仪器变异系数在2.0％以内 ， 上机后收集10000个细胞 ， 荧光强度以对数放大 ， 测定光散射数据 ， 结果采用macintosh650型计算机及cell quest plot软件进行数据分析 。
(三)统计学处理：两样本均数u检验 ， spearman等级相关分析 。
二、结果
1.银屑病患者治疗前后即进行期和缓解期apo-1、apo-2.7、bcl-2在淋巴细胞上的表达水平：见表1 。
表1　不同阶段银屑病患者外周血淋巴细胞apo-1、apo-2.7和bcl-2的表达水平(±s ， %)
组　别例　数apo-1apo-2.7bcl-2健康对照组200.53±0.240.90±0.6235.87±5.35银屑病组进行期305.59±2.86＊＊△9.37±4.54＊＊△2.98±2.19＊＊△△缓解期302.74±1.91＊4.70±3.01＊13.33±4.72＊＊ 注：与健康对照比较＊p＜0.05 ， ＊＊p＜0.01；进行期与缓解期比较△p＜0.05 ， △△p＜0.01
2.相关分析显示：银屑病患者pblc对bcl-2的表达水平与pasi呈明显负相关(rs=－0.614 ， p＜0.01) ， 与病程无关；bcl-2与apo-1、apo-2．7亦呈负相关(rs值分别为－0.414、－0.443 ， p＜0.05)；apo-1与apo-2．7呈正相关(rs=0.434 ， p＜0.05) ， 二者在pblc上的表达均与pasi呈正相关(rs=0.435、0.412 ， p＜0.05) ， 而与病程不相关 。
三、讨论
fas系统和bcl-2家族是调节淋巴细胞凋亡最重要的两类基因[3] ， 其表达产物apo-1、apo-2.7和bcl-2蛋白分布于淋巴细胞线粒体膜、内质网及细胞膜上 ， 对淋巴细胞发育、分化、活化和清除有重要调节作用 ， 是维护机体免疫自稳机制的基础[4 ， 5] 。其中apo-1和apo-2．7是促使淋巴细胞凋亡的蛋白 ， bcl-2则是凋亡抑制蛋白[5 ， 6] 。实验结果显示银屑病患者pblc表达bcl-2的水平明显低于对照组 ， 经中药及uvn光等治疗后病情缓解 ， bcl-2水平也随之提高 ， 但仍较对照组明显偏低 ， 说明银屑病患者pblc的抗凋亡水平下降 。同时 ， 银屑病患者pblc的apo-1、apo-2．7水平均高于对照组 ， 说明银屑病患者pblc凋亡基因的表达水平上调 。pblc的凋亡基因过表达与抗凋亡基因失表达 ， 两方面都使pblc对凋亡的易感性增加 。

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