co2激光作为治疗尖锐湿疣的有效手段被广泛应用，但我们在临床中发现少数患者治疗后出现尖锐湿疣复发 。因此，我们自1997年1～4月收集了co2激光治疗尖 锐湿疣的烟雾标本，用pcr方法进行hpv dna的检测，现报道如下 。
文章插图
一、材料和方法
(一)标本来源：20例均为具有典型皮损，临床确诊为尖锐湿疣的门诊患者 。其分布部位为冠 状沟、包皮、阴茎、大小阴唇 。
(二)标本的收集和贮存：治疗前后用短波紫外线对操作周围进行照射消毒 。将co2激光调 至10w左右，激光枪与垂直线呈10°～20°角，使飞溅的烟雾能不受阻挡垂直上升 。同时在疣体上方2cm处，用生理盐水浸润的消毒棉签熏蒸，时间尽可能长，使棉签呈焦黄色，不可碰触疣体及激光头，否则将其删除 。之后将棉签放入消毒试管中，-4℃冷藏待测 。
(三)pcr：采用军事医学科学院放射医学研究所生产的pcr诊断试验盒，内含hpv6、11dna引物，具体步骤如下 。将标本充分溶于0.5ml离心管中，加200μl生理盐水混匀，8 000r/min离心5分钟，弃上清液，加50μl裂解液，55℃ 1小时后，100℃煮沸10分钟，15000 r/min离心10分钟，取上清液5μl作为hpv dna模板，加入pcr混合物15μl，裂解液0.2μl，石蜡油20μl混合，按下列条件进行pcr扩增 。变性94℃、60秒；退火50℃、60秒；延伸72 ℃、60秒；循环次数35次 。取pcr扩增溶液10μl直接上样于1.5%琼脂糖凝胶进行电泳，在紫外灯光下观察有450bp的橙色荧光带者即为阳性 。同时对试验盒内阴阳性对照标本进行同样处理 。
【用聚合酶链反应检测CO2激光治疗尖锐湿疣烟雾中的HPVDNA】 二、结果
20份烟雾标本中有1份阳性 。并将阳性标本送浙江医科大学重复检测，证实确为阳性 。在pcr 检测中，试验盒中对照标本均相应显示 。
三、讨论
carden等［1］证实co2激光烟雾中有存活的hpv 。少量co2 激光烟雾中存在hpv的原因主要有：①疣体突出部分较疏松，大功率co2激光照射时，其 光压易使疣组织向四周飞溅 。②由于co2激光使组织气化时，形成微型爆炸，当其发生在突出的疣体侧缘时，易使上端较疏松的疣组织向四周播散 。顾恒等［2］对21例尖锐湿疣co2激光烟尘中的hpv进行pcr测定，均为阴性 。而我们检测了20例，有1例hpv6、11型dna阳性 。产生两者差异的原因可能为观察例数较少，而出现概 率上的差异 。
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