慢性荨麻疹(chronic urticaria ， cu)是一种常见病、多发病 ， 临床表现迁延顽固 ， 对常规抗组胺药物反应性差 ， 治疗效果不好 。较多的慢性荨麻疹患者找不到明确的过敏原及病因 。近年研究显示 ， 部分此类患者血清存在组胺释放活性 。进一步研究证实 ， 这种组胺释放活性是由自身抗体所致 ， 大部分为抗高亲和力ige受体(fcεr1)自身抗体 ， 少部分为抗ige抗体或其它 。此类自身免疫性荨麻疹的病情与自身抗体的滴度和组胺释放活性相平行 。自身免疫性cu在临床上难以治疗 ， 给予血浆透析或免疫调节治疗后常可使症状得到缓解 ， 所以cu自身抗体的检测 ， 将有助于对自身免疫性cu的诊断、病情监测及治疗 。
文章插图
1 自身抗体的检测方法
1.1 自身血清皮肤试验 常规抽血后 ， 使血液在无菌试管里凝结30min ， 并在室温下离心 ， 取血清100μl用无菌注射器重新注入该抽血病人的真皮内 。注射部位为前臂屈侧 。取等体积无菌生理盐水注入对侧同样部位做为对照 。注射后观察皮肤反应 ， 如有风团红斑发生 ， 需要用尺子测量并记录 ， 阳性标准为注射血清后2h内 ， 出现风团 ， 直径大于对照5mm ， 或出现红斑直径大于对照10mm 。有的作者注射血清量为50μl ， 采用磷酸盐缓冲液作对照 ， 阳性标准为注射后60min ， 风团直径超过9mm 。自身血清皮肤试验阳性 ， 表明血清中存在可使皮肤mc脱颗粒的物质 。它不可能是ige ， 因为ige不可能使同一个体的mc致敏 。正常对照的自身血清皮肤试验均显示阴性 ， 且皮试阳性血清与cu病情有明显的相关性 ， 与病情的改变相平行[1 ， 2] 。
1.2 组胺释放试验 取正常人外周血 ， 用葡聚糖泛影葡胺沉淀法分离白细胞 。收集富含嗜碱粒细胞的白细胞层 ， 平衡盐缓冲液洗细胞两次 ， 用含2mmol/lmgcl2及2mmol/lcacl2的缓冲盐溶液冲洗细胞 。取50μl待检血清与同体积白细胞悬液37℃孵育40min 。在4℃条件下 ， 测定血清中的组胺含量 ， 等量的白细胞悬液煮沸后 ， 测定总的嗜碱粒细胞组胺含量 。组胺释放以加入刺激因子 ， 引起的组胺释放占嗜碱粒细胞所含有组胺总量的百分比来表示[3～5] 。组胺释放试验是一种在体外进行的功能性试验 ， 它可以证明患者血清中组胺释放活性的有无 ， 而不能鉴定该种活性的引起是何种抗体 。hide利用乳酸使ige与嗜碱粒细胞解离 ， 或用骨髓瘤ige使嗜碱粒细胞致敏的方法 ， 可鉴定出这种组胺释放活性是否依靠ige ， 进而判断是否为抗ige自身抗体[4] 。人工培养和分离的肥大细胞及正常皮肤的超薄切片均可用于上述的组胺释放试验 。
1.3 免疫印迹方法 人高亲和力ige受体的α链是ige的结合配体 。实验证明含ige结合表位的膜外区α链 ， 不需要其跨膜区、胞内末尾及β、γ链即能在体外与ige及抗fcεr1抗体结合[6～8] 。有几位作者用基因工程表达的可溶性重组α链(fcεr1α)进行免疫印迹 ， 检测抗fcεr1自身抗体 。实验首先将纯化的fcεr1α煮沸并用2?巯基乙醇还原 ， 经10％～13％sds?page电泳后 ， 转印至硝酸纤维素膜上 ， 用5％脱脂奶粉封闭90min ， 与1∶500的待检血清反应后 ， 加入碱性磷酸酶标记的羊抗人igg抗体 ， 最后加入bcip/nbt显色 。ferrer用该方法检测cu患者的血清得到了64％的阳性率 ， 阳性率虽高于上述两种方法 ， 但也有上述两种方法检测到的阳性的血清 ， 而用免疫印迹方法则为阴性 ， 这说明慢性荨麻疹患者血清中存在非功能性的自身抗体 。
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