肾上腺皮质激素在治疗瘢痕疙瘩中取得了显著疗效 ， 但对其作用机理的看法并不一致 。我们选用确炎舒松a(ta)瘢痕组织内注射治疗4个月 ， 手术切取治疗前后新鲜瘢痕组织 ， 测定羟脯氨酸含量及ⅰ、ⅲ型胶原蛋白含量 ， 同时观察其形态学变化 ， 以探讨ta对瘢痕疙瘩胶原代谢影响的机制 。
文章插图
一、材料和方法
(一)病例：瘢痕疙瘩患者8例 ， 面颊1例、前胸2例、背1例、耳垂3例、下腹1例；男4例 ， 女4例；年龄27～42岁 ， 平均34.5岁；病程5个月至15年 ， 平均7.8年；正常对照组取自做其他整形手术时切除的正常皮肤(非瘢痕疙瘩患者) ， 共7例 ， 面颊1例、前胸5例、背1例；男3例 ， 女4例；年龄24～45岁 ， 平均34.5岁 。
(二)主要试剂：
1.ta注射液：选用2％利多卡因作为稀释液 ， 每次注射时 ， 抽取1ml ta溶液(10mg)与2ml 2％利多卡因(40mg)混匀配制成浓度为20％ ta注射液 。75％酒精消毒皮损后 ， 依次从皮损边缘处边进针边将药物缓慢注入瘢痕组织内 ， 直到局部皮肤呈白色 。若3ml药物用完后仍有未注射的皮损 ， 考虑下次治疗 。
2.每例患者每处皮损平均半月治疗1次 ， 4次一个疗程 ， 共治疗2个疗程(ta由上海第九制药厂提供) 。
(三)方法：无菌条件下 ， 切取新鲜皮损组织 ， 去净周围结缔组织 ， 进行预处理 。
1.羟脯氨酸含量测定： 将经乙醇脱水、氯仿脱脂的组织置入盐酸水解 ， 加0.2mol/l氯胺-t氧化 ， 加甲苯 ， 1000r/min离心3分 ， 取水层液煮沸 ， 冷却 ， 加甲苯振荡 ， 吸取2ml甲苯层溶液置一干净试管 ， 加艾氏溶液氧化 ， 溶液将变成不同深度紫红色 ， 用722紫外分光光度计测a560值 。
2.ⅰ、ⅲ 型可溶性胶原蛋白测定：取出－20℃保存组织用0.5mol/l冰醋酸、胃蛋白酶提取 ， 上清液加nacl溶液(0.9mol/l)盐析 ， 沉淀置透析袋 ， 用0.05mol/l冰醋酸透析 ， 真空冷冻干燥 ， 称重 ， 溶于样品缓冲液 ， －20℃保存 。ⅰ 型胶原蛋白提取：将上清液加入nacl溶液(2.6mol/l) ， 离心 ， 收集沉淀 ， 称重 ， 计算出相对浓度 。ⅲ型胶原蛋白提取：取ⅰ、ⅲ 型混合物悬浮于nacl溶液(1.7mol/l) ， 0.05mol/l tris缓冲液(ph7.5) ， 离心 ， 沉淀即ⅲ型胶原 ， 称重 。
【确确炎舒松A炎舒松A对瘢痕疙瘩胶原代谢的影响】 4.组织形态学观察：新鲜组织分别置10％中性福尔马林液固定24小时和6％戊二醛磷酸缓冲液固定过夜 ， 常规包埋、染色、切片、光镜及透射电镜观察 。
二、结果
1.取10μg/ml l-4-羟脯氨酸标准溶液0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml ， 按上述方法测得a560值分别为：0.039、0.289、0.339、0.66 。求得直线回归方程：y=－0.052±0.096x ， y：a值 ， x：羟脯氨酸含量(μg) 。
2.ta治疗前羟脯氨酸含量为13.61±2.4μg(±s ， 下同) ， 对照组5.2±1.97μg ， 两组经t检验 ， t=7.34 ， p＜ 0.01 ， 说明瘢痕疙瘩组织羟脯氨酸含量明显增高；治疗后为6.31±2.4μg ， 与治疗前相比 ， t=5.88 ， p＜ 0.01；与对照组相比 ， t=0.95 ， p ＞0.05 ， 说明经一个疗程治疗 ， 羟脯氨酸含量降低 。
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