系统性红斑狼疮患者外周单核细胞血CD40L表达增加及其临床意义

2022-05-22 生活百科单核细胞

了解cd40l在sle患者自身抗体及免疫复合物形成中的作用。方法　采用流式细胞计数仪，对10例活动期sle、10例缓解期sle患者外周血单一核细胞cd40l的表达进行了研究。结果　活动期sle组cd40l表达在抗cd3单抗刺激前后均显著高于正常对照组，而缓解期sle组t细胞在抗cd3单抗刺激前的cd40l表达在正常范围内，在刺激后显著高于正常对照组。结论　sle中cd40－cd40l途径存在缺陷，为进一步探讨sle的发病机制

系统性红斑狼疮患者外周单核细胞血CD40L表达增加及其临床意义

文章插图

系统性红斑狼疮（sle）的主要病理改变是免疫复合物造成的器官和组织损伤。自身抗原特异性辅助性t细胞（th）在病理性自身抗体的形成中起重要作用。而th细胞通过cd40－cd40l连接作用于b细胞，从而诱导b细胞活化、增殖，产生从igm到igg的抗体[1] 。为了研究cd40－cd40l途径在sle中的作用，我们应用流式细胞计数仪，对10例活动期sle、10例缓解期sle患者及正常人外周血t细胞在抗cd3单抗刺激前后的cd40l表达进行了分析。
材料与方法
(一)患者:活动期sle患者10例，平均年龄40岁，均为女性；缓解期sle患者10例，平均年龄45岁，均为女性。所有患者均符合1982年美国风湿病学会制定的sle分类标准[2] 。正常对照组20例，取自献血者。
(二)主要试剂和仪器:fitc标记的抗cd40l、抗cd25抗体，tritc标记的抗cd3单抗，正常小鼠igg(sigma公司) 。细胞洗涤液为含2％灭活小牛血清和0.01％nan3的pbs，0.15mol/lrbs溶解液，含0.8％戊二醛固定液的pbs 。
稀释液：peg6000 40.0g，naf 10.0g，na2hpo4·12h2o 101.5g，nah2po4·2h2o 10.0g，nan31.0g，用蒸馏水溶解后加至1000ml，用g3玻璃滤器过滤，室温保存。
流式细胞计数仪为epics型（美国coulter公司产品）。
(三)细胞培养:患者和正常人外周血单一核细胞（pbmc）经ficoll-hypaque液分离，在37℃，5％co2中培养，培养基含rpmi1640，10％小牛血清，160u/ml青霉素和链霉素。1×106外周血单一核细胞(pbmc)在1ml培养基中单独或与抗cd3单抗共同孵育6h、24h、48h 。
(四)流式细胞术分析:取50μl细胞悬液，分别加入fitc标记的抗cd40l、抗cd25单抗各20μl，在对照管中加入正常小鼠igg 20μl，混匀后置4℃30min，用pbs洗3次，弃去上清液，加固定液0.5ml，
尼龙网过滤后进行流式细胞计数分析。
(五)应用t检验进行统计学分析。
结果
1.在未经抗cd3单抗刺激时，活动期sle患者pbmc中cd40l的表达比正常对照组显著增高（p＜0.01)，而缓解期sle患者与正常对照组差异无显著性.在经搞cd3音搞刺激6h后，3组的cd40l表达均增加，而活动期和缓解期sle患者均与正常对照组差别有显著性.见表1.
表1　sle患者外周血单一核细胞cd40l在搞cd3单搞刺激前后的表达(%)
分组例数刺激前刺激后±stt值*p值±stt值*p值正常对照组200.89±--3.98±1.28--sle患者活动期1018.04±2.106.50＜0.0125.24±2.875.53＜0.01缓解期101.25±0.201.93＞0.0516，52±2.023.40＜0.01 注：*与正常对照组比较
2.活动期sle患者pbmc的cd40l表达在经抗cd3单抗刺激6h后就显著增多，24h达高峰，到48h有所下降，但仍然高于正常。而缓解期sle患者与正常对照组相似，在6h达高峰，至48h已接近正常。与cd40l不同，活动期sle患者cd25（tac）表达与缓解期sle患者、正常对照组在48h内较相似(表2、3) 。
表2　sle患者外周血单一核细胞经抗cd3单抗刺激后的cd40l表达(荧光道数)
分组例数时间oh6h24h48h正常对照组2051.5±17.4128.6±65.898.2±27.970.2±25.7sle患者00000活动期1075.4±20.9187.2±64.3198.4±87.2111.8±39.8缓解期1053.1±16.3178.4±50.9112.8±25.978.9±22.3 表3　sle患者外周血单一核细胞经搞cd3单搞刺激后的cd25表达（荧光道数）

经验总结扩展阅读

上一篇：喉肌弱症的主要临床表现是什么

下一篇：声带肥厚是怎样形成的